Cómo los científicos cortan el adn con enzimas de restricción

Los científicos usan enzimas de restricción para cortar el ADN en piezas más pequeñas para que puedan analizar y manipular el ADN con más facilidad. Cada enzima de restricción reconoce y se puede unir a una cierta secuencia en el ADN llama una sitio de restricción.

Se puede pensar en enzimas de restricción como pequeñas tijeras moleculares que se deslizan a lo largo del ADN y cortar el esqueleto de azúcar-fosfato dondequiera que encuentran su sitio de restricción.

La figura muestra cómo una enzima de restricción puede hacer un corte en una pieza circular de DNA y convertirlo en una pieza lineal.

Video: GENÉTICA - ENZIMAS DE RESTRICCIÓN (ENDONUCLEASAS)

Algunas enzimas de restricción hacen un corte recto a través de la columna vertebral del ADN, mientras que otros, como el mostrado en la figura anterior, hacer cortes escalonados. Las enzimas que hacen cortes escalonados dejan pequeñas piezas de ADN de una sola cadena en los extremos de los fragmentos que cortan. Los científicos llaman a estas piezas monocatenarios extremos pegajosos porque tienen secuencias complementarias entre sí y tienden a pegarse entre sí por enlaces de hidrógeno.

Usted puede obtener dos piezas diferentes de ADN que permanecer juntos si ellos tanto cortado con una enzima de restricción que hace extremos pegajosos. Las dos piezas tienden a unir entre sí, por lo que es posible combinarlos en una ADN recombinante molécula que tiene de ADN a partir de dos fuentes.

1. Una pieza pequeña, lineal de ADN viral se muestra en la siguiente figura. El ADN viral contiene sitios de restricción para dos enzimas de restricción diferentes, llamado EcoR1 y HindIII.

   Las localizaciones de los sitios de restricción están marcados con las flechas en la imagen del ADN viral. La longitud del ADN se da en kb, que significa pares de kilobases. (Kilo medio mil, por lo que una kilobase es de 1000 pares de bases de ADN.)

   Si ha utilizado simplemente EcoR1 para cortar una muestra que contenía muchas copias de este trozo de ADN, ¿cuántas diferente darían como resultado trozos de tamaño de ADN? ¿De qué tamaño serían? Si se corta el ADN con sólo HindIII, lo que daría como resultado? ¿Y qué pasaría si se corta el ADN con ambas enzimas?

   
   Ejemplo de corte de ADN con enzimas de restricción.

   por preguntas 2-4, probar su comprensión de las enzimas de restricción mediante el uso de la información en la siguiente figura para responder a las preguntas.

   Practicar con enzimas de restricción. Una pieza circular de ADN, llamada plásmido, es de 80 kb de longitud. Las marcas en el plásmido indican los sitios de restricción para las enzimas EcoR1 y BamH1.

2. ¿Qué tipos de fragmentos de ADN resultaría si se va a cortar una muestra de ADN que contiene muchas copias del plásmido se muestran en la figura con la enzima de restricción EcoR1?

a. 1/2 20 kb, 1/4 30 kb, 1/4 10 kb

segundo. 1/2 20 kb, 1/2 60 kb

do. 1/2 30 kb, 1/2 50 kb

re. Todos los 80 kb

1. ¿Qué tipos de fragmentos de ADN que resultaría si se va a cortar el plásmido se muestra con las dos enzimas de restricción, EcoR1 y BamH1?

a. 1/2 20 kb, 1/4 30 kb, 1/4 10 kb

segundo. 1/2 20 kb, 1/2 60 kb

do. 1/2 30 kb, 1/2 50 kb

re. Todos los 80 kb

1. ¿Qué tipos de fragmentos de ADN resultaría si se va a cortar el plásmido se muestra con la enzima de restricción HindIII?

a. 1/2 20 kb, 1/4 30 kb, 1/4 10 kb

segundo. 1/2 20 kb, 1/2 60 kb

Video: Clonación de un gen, Biología

do. 1/2 30 kb, 1/2 50 kb

re. Todos los 80 kb

Las siguientes son las respuestas para las preguntas de práctica.

1. Si se corta el ADN con sólo EcoR1, el ADN sería cortado justo en el medio. Todas las piezas serían del mismo tamaño, lo que sería de 15 kb de longitud.

   Si se corta el ADN con sólo HindIII, el ADN sería cortada en la marca de 22,5 kb. La mitad de las piezas de ADN sería de 22,5 kb de largo, y la otra mitad sería de 7,5 kb de longitud (30 kb - 22,5 kb = 7,5 kb).

   Si se corta el ADN con las dos enzimas de restricción, se obtendría dos cortes - uno en el punto de los 15 kb hasta la mitad y la otra en la marca de 22,5 kb. Así, la mitad de las piezas sería de 15 kb de longitud. La otra mitad sería todo ser de 7,5 kb de longitud (porque el corte en 22,5 kb sería justo en el medio de la segunda mitad del ADN.)

2. La respuesta es b. 1/2 20 kb, 1/2 60 kb.

   EcoR1 haría dos cortes en cada plásmido. Un fragmento sería la longitud desde 0kb a 20kb, que se 20kb- el otro fragmento sería la longitud de 20kb de nuevo a 80kb, que es de 60 KB.

3. La respuesta es: a. 1/2 20 kb, 1/4 30 kb, 1/4 10 kb.

   Si se corta los plásmidos con las dos enzimas de restricción, que terminarías con cuatro fragmentos por dos plásmido - 20 kb de longitud, uno 30kb, y uno de 10 kb.

4. La respuesta es d. Todos los 80 kb.

   Si se corta el plásmido con la enzima de restricción PosteriorIII, que no puedes tener ningún recorte porque no hay sitios de restricción para esta enzima (enzimas de restricción son específicos para los sitios que reconocen).